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ELISA试剂盒中单克隆抗体与阻断剂如何协同消除交叉反应干扰?

更新时间:2026-02-04点击次数:30
  在ELISA试剂盒中,单克隆抗体提供“精准靶向”,而阻断剂则负责“清扫战场”,二者协同作战,共同消除因非特异性结合导致的交叉反应干扰,确保检测结果的准确性。
  1.单克隆抗体的精准“锁定”
  单克隆抗体是实现高特异性的核心。它是只针对抗原上某一个特定表位(抗原决定簇)的单一类型抗体,其结合高度专一,类似于一把精确的“锁”只开一把“钥匙”。这种特性能从结构上避免与样本中其他结构相似的非目标物质发生交叉结合,从而从源头降低交叉反应的理论风险。
  2.阻断剂的全面“清扫”
  单抗的特异性并非绝对,且固相载体表面(如酶标板)本身也容易非特异性吸附蛋白质。阻断剂在此扮演“清道夫”角色,主要作用有二:
  封闭非特异性位点:在包被捕获抗体后,会加入高浓度的惰性蛋白质溶液(如牛血清白蛋白、脱脂奶粉或酪蛋白)进行封闭。它们会抢先“占据”酶标板上所有未结合抗体的空白区域,形成一层保护膜,阻止后续样本中其他杂蛋白的非特异性吸附。
  中和潜在干扰:针对特定干扰,如在涉及生物素-链霉亲和素系统的ELISA中,会使用封闭剂中的高浓度游离生物素,预先中和样本中可能含有的内源性生物素,阻断其与标记的链霉亲和素结合,从而消除假阳性信号。
  3.二者的协同增效
  两者的协同是“主动选择”与“被动防御”的结合:
  单克隆抗体作为主动识别元件,以其特异性主动、精准地捕获目标抗原。
  阻断剂作为被动防护系统,在反应体系的各个环节提前占据或中和所有可能导致非特异性结合的位点和物质。
  这种设计相当于为精确制导系统(单抗)配备了完善的电磁干扰屏蔽(阻断剂),使ELISA能够在成分复杂的样本(如血清、细胞裂解液)中,将背景噪音降至低,从而准确放大和检测出真正的目标信号,是保证其高灵敏度和高特异性的关键。
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